¶ PBMC免疫测试
PBMC免疫测试（Peripheral Blood Mononuclear Cell-based Immunotoxicity Assay）是一种基于人体外周血单核细胞的体外免疫毒性评估技术，用于预测药物（尤其是生物制剂如单克隆抗体）在人体内可能引发的免疫反应风险。
¶ 一、PBMC
全称：外周血单核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells）
组成：包含人体免疫系统的核心细胞类型：
T细胞（负责细胞免疫）
B细胞（产生抗体）
NK细胞（自然杀伤细胞）
单核细胞（分化为巨噬细胞/树突状细胞）
来源：从健康志愿者或患者的外周血中分离获得（通过密度梯度离心法）。
¶ 二、PBMC免疫测试的核心原理
通过体外模拟药物与人体免疫细胞的相互作用，检测以下关键反应：
细胞因子风暴（Cytokine Release Syndrome, CRS）：测量药物刺激后IL-6、TNF-α、IFN-γ等炎症因子的释放水平。
T细胞活化：检测CD69/CD25等T细胞活化标志物的表达。
免疫细胞增殖/凋亡：分析细胞分裂指数（CFSE染色）或凋亡率（Annexin V检测）。
典型案例：在文件中提到的TGN1412单抗灾难（页2、页3）中，若使用PBMC测试，可提前预测其引发极端免疫风暴的风险（传统猴模型未能预警）。
原文下载地址：https://fb.biokingdom.top/f/51bf2594322a40f49394/
¶ 三、操作流程
¶ 四、在减少动物测试中的核心价值
直接人体相关性：使用人体原代免疫细胞，避免动物模型跨物种差异（如文件页2指出猴模型对某些单抗不敏感）。
替代高风险动物实验：可取代部分非人灵长类（NHP） 试验（页2：NHP测试成本高达$8万/次）。
精准预测免疫毒性：文献支持其预测CRS的准确性 >80%（页11引用7：Vessiliier et al. 2015）。
符合监管趋势：FDA路线图明确将PBMC列为关键NAMs（页6-7），用于单抗开发的免疫风险评估。
¶ 五、技术局限性与解决方案
| 局限性 | 解决方案 | 文件依据 |
|---|---|---|
| 缺乏组织微环境 | 结合器官芯片（MPS） 共培养 | 页3：MPS模型 |
| 供体个体差异 | 多供体混合测试（≥10人） | 页7：标准化建议 |
| 无法模拟慢性反应 | 整合计算模型（AI/ML） 预测 | 页3：AI/ML应用 |
¶ 六、实际应用场景（文件案例）
单克隆抗体（mAbs）安全评估（页2）：替代90%的动物测试，尤其适用于Fc受体结合型抗体（如CD28超激动剂）。
FDA监管接受案例（页7）：在IND/BLA申请中提交PBMC数据，支持减少或豁免动物试验。
组合测试策略（页4）与PBPK模型、器官芯片联用，构建“虚拟人体”毒性预测系统。
¶ 七、未来发展方向
标准化协议：ICCVAM（页8）正推动统一PBMC测试的GLP标准。
AI增强分析：结合机器学习预测个体化免疫风险（页11引用11：AbImmPred模型）。
动态培养系统：开发微流体装置模拟体内免疫细胞循环（页3：MPS整合方向）。
¶ 八、总结
PBMC免疫测试是减少动物依赖的关键NAMs技术，通过直接利用人体免疫细胞在体外预测药物免疫毒性。FDA路线图（页6-7）将其定位为单抗类药物的优先替代方案，并正在通过跨机构协作（ICCVAM/NIH）推动其标准化和监管接受。未来该技术将与器官芯片、AI模型深度整合，逐步实现“动物测试作为例外”的愿景（页6）。