使用CorePlate™系列培养皿(1W 38/60、6W 38/60 型号) 完成iCell® Cardiomyocytes2(iCell 心肌细胞)的稳定培养与电生理记录,适用于电生理研究、药理学筛选等场景。
使用CorePlate™ 1W/6W 38/60 培养皿完成 DRG 细胞的解剖解离、原代培养与电生理记录,适用于神经生理学、疼痛机制、神经损伤修复等研究场景(DRG 细胞为外周神经系统关键感觉神经元模型)。
/ldw/3brain/protocol/protocol_for_culturing_primary_rat_mouse_embryonic_neurons_on_coreplatetm.pdf
使用CorePlate™ 1W 38/60、6W 38/60 型号培养皿,完成大鼠 / 小鼠胚胎原代神经元(通常取自 E16-E18 胚胎的皮质或海马组织)的分离、培养及后续电生理记录,为神经科学相关研究(如神经元功能、神经回路等)提供标准化操作流程。
/ldw/3brain/protocol/protocol_for_culturing_primary_rat_mouse_postnatal_(p0-p2)_neurons_on_coreplatetm.pdf
使用CorePlate™ 1W 38/60、6W 38/60 型号培养皿,完成大鼠 / 小鼠产后(P0-P2 日龄)原代神经元(取自皮质或海马组织)的分离、培养及后续电生理记录,为神经科学领域相关研究(如产后神经元发育、功能调控等)提供标准化操作依据。
使用CorePlate™ 1W 38/60 型号培养皿,完成小鼠视网膜外植体的解剖分离、灌注维持及后续电生理记录,为视网膜神经功能(如光响应、神经信号传导)相关研究提供标准化操作依据。
所有文件均为3Brain 公司发布的标准化实验方案(Protocol),核心围绕CorePlate™系列培养皿(1W 38/60、6W 38/60 型号) 开展,覆盖细胞培养、组织解剖、电生理记录三大核心场景。实验对象分为三类:① 商业化细胞系(iCell 心肌细胞);② 原代细胞(胚胎 / 产后神经元、背根神经节细胞);③ 组织外植体(小鼠视网膜),最终目的均为实现细胞 / 组织的稳定培养与可靠的电生理记录。
文件可分为两组:
目的是提升培养皿亲水性与细胞 / 组织粘附力,避免设备损伤:
| 实验对象 | 来源 / 特性 | 核心特殊流程 | 关键试剂 / 参数 | 核心注意事项 |
|---|---|---|---|---|
| iCell 心肌细胞(文件 1) | 富士胶片 CDI 商业化 iPSC 衍生细胞(含心房 / 结 / 心室样细胞,自发电活动) | 无需解剖解离,直接解冻复苏 | - 涂层:纤连蛋白(50μg/mL);- 培养基:专用接种 / 维持培养基;- 接种密度:800-900 细胞 /μL(50-70μL / 孔) | 冷冻细胞需全程维持低温,避免反复冻融 |
| E18 胚胎 DRG 细胞(文件 2) | 大鼠 E18 胚胎背根神经节 | 解剖→酶解→机械解离→抑制胶质细胞 | - 涂层:多鸟氨酸(50μg/mL)/ 多聚 D - 赖氨酸(100μg/mL)+ 层粘连蛋白(25-50μg/mL);- 酶解:胰蛋白酶(0.25%)+ DNA 酶(0.05%);- 接种密度:35k 细胞 / 孔;- 特殊处理:24-36 小时加 2μM ARA-C(48h,抑制胶质细胞过度生长) | DIV6 开始出现自发活动,记录前 36 小时避应激 |
| 大鼠 / 小鼠胚胎神经元(文件 3) | E16-E18 胚胎皮质 / 海马 | 解剖→物种特异性酶解→机械解离 | - 涂层:多鸟氨酸 / 多聚赖氨酸(100μg/mL);- 酶解:小鼠用木瓜蛋白酶(1mg/mL),大鼠用胰蛋白酶(0.125%)+ DNA 酶(50μg/mL);- 接种密度:1500-3000 细胞 /mm² | 培养基每周更换 1/3-1/2,成熟后可每周换 2 次 |
| 大鼠 / 小鼠产后神经元(文件 4) | P0-P2 幼崽皮质 / 海马 | 解剖→强化酶解→可选纯化→添加生长因子 | - 涂层:可选层粘连蛋白(50μg/mL);- 酶解:小鼠木瓜蛋白酶(2mg/mL),大鼠胰蛋白酶(0.25%)+ DNA 酶;- 接种密度:1500-3000 细胞 /mm²;- 特殊处理:24-48 小时加 0.5-1.5μM ARA-C,可选加 BDNF(10ng/mL)+ IGF-1(1.5ng/mL) | 可通过 BSA 梯度纯化去除细胞碎片 |
| 小鼠视网膜外植体(文件 5/6) | 小鼠视网膜(需完整结构) | 暗适应→精细解剖→灌注维持→贴合电极 | - 培养基:Ames 培养基(含 L - 谷氨酰胺,95% O₂/5% CO₂氧合);- 灌注速率:3-5mL/min;- 操作:暗环境下解剖(微红 / 红外光),放射状切口展平 | 禁止用镊子接触视网膜;光刺激从上方引入(芯片不透明);灌注管路需用去离子水 + 乙醇清洁 |