我们强烈建议遵循列出的芯片处理重要预防措施,以保持生物芯片的功能和完整性。
来自斯普雷格-道利大鼠胚胎E17-18的海马或皮层神经元。
胚胎在无菌条件下根据已发布的协议1被取出并解剖,然后通过在37°C下使用胰蛋白酶或木瓜蛋 白酶进行15-20分钟的酶消化来分离皮层和海马。最后,使用火抛光的巴斯德吸管进行研磨。
在灭菌之前,如果芯片已经干燥很长时间,我们建议用去离子水填充腔室,并重新水合1-2小时 。
BioChip腔体用70%的乙醇填充20分钟,冲洗4-5次无菌去离子水,然后在层流罩下干燥。由于紫外线 或高压灭菌方法可能会损坏BioChip,因此不使用这些方法。同时避免将整个芯片浸入乙醇中,以免 影响设备基材。更长时间的乙醇灭菌或使用更高浓度的乙醇可能会影响BioChip的功能。
建议使用三种不同的涂层:
建议的滴液体积为 BioChip4096S 的 30 µL,以及 BioChip4096S+ 和 BioChip4096E 的 90 µL。
对于标准培养,神经元被铺在BioChip4096S上,使用30-40 µL的液滴,包含名义上30,000到60,000个 细胞(~1,000-1,500细胞/µL)在活跃区域。对于BioChip4096S+和BioChip4096E,液滴应为80-90 µL ,并保持相似浓度,即~1,000-1,500细胞/µL。然后将BioChip放入培养箱中,经过3-5小时后,腔室中 加入~1.5 ml培养基(1% Glutamax,2% B-27补充的Invitrogen神经基础培养基)。
培养物在37°C的湿润温度下保持在5% CO2,95%空气中。每周更换三分之一到一半的培养基以平衡蒸发。为了避免强蒸发导致的渗透压失衡,BioChip可以与一个装有2 mL无菌水的小开口培养皿一 起放在一个培养皿中(此外,封闭的培养皿可以在边缘用一层薄薄的石蜡膜密封)。每2-3天视觉检查pH值;如果培养基颜色表明酸化过程(从粉红色转变为橙黄色),则预计会更换培养基。
记录后,BioChip 用去离子水(DDW)冲洗,然后使用软刷和清洁剂如 WPI-Enzol(WPI)或 TergA-zyme(Alconox)轻轻清洁。最后,BioChip 用去离子水(DDW)充分冲洗。
一旦生物芯片干燥后,可以将其存放在一个封闭的盒子中,以保护记录区域免受灰尘和污垢的影响 。