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CelVivo ClinoStar Demo 实战手册 — Demo 前沟通版

版本: V1 合并版 (Checklist + 客户现场准备)
整理日期: 2026-09-01
整合自:

适用场景: 客户来 我 实验室做 CelVivo ClinoStar Demo 前沟通文档 (可直接发给客户)


🎯 文档目标

本手册是一份 Demo 前沟通文档, 核心目的:

  1. 客户来之前, 提前知道 我 这边需要什么、我 实验室能做什么
  2. 客户来当天, 9 件套必带 + 5 项必填信息 + 7 件必签文档 + 我 必查 4 件套
  3. Demo 期间, 4 大客户类型差异化 SOP + 救球 3 件套 + 7 天 / 14 天 / 28 天完整时间表

📚 CelVivo KB 13 份 Protocol 实战一览 (必读标星)

编号 Protocol 实战价值 Demo 必读
001 Cultivating 总纲 Self-assembly / 低粘附微孔板 / 水凝胶 三路径 ⭐⭐⭐
003 ClinoReactor 准备 标准流程 ⭐⭐
004 换液 48h / 48h / 72h / 48h 周期 ⭐⭐⭐
006 Gardening 均化 P200 tip 移除不规则聚球 ⭐⭐⭐⭐⭐ 救球
007 球体转移 4-5 mL 装载 ⭐⭐⭐
008 单细胞自组装 5-6 mL + 1-2 × 10⁶ + 3-6 RPM ⭐⭐⭐⭐⭐
009 低粘附微孔板预聚球 Kugelmeiers Spherical 5D + 1000 cells/well + 100 × g 3 min + 过夜 + 2-3 mL 转入 + 6-9 RPM ⭐⭐⭐⭐⭐ 想均一必走
010 Ultra Low Adherent ClinoReactor Biofloat Clean Coating ⭐⭐
011 共培养 HepG2/LX-2 90/10 = 1.125 × 10⁶ total ⭐⭐
012 转速调整 Day 0 = 3-6 RPM, Table 1 每日递增, Day 9 单细胞 13-20 RPM, Day 5 低粘附微孔板 10-16 RPM ⭐⭐⭐⭐⭐
013 70/100 μm 过滤 PluriSelect 100/400 μm 双层, back flush 2-4 mL ⭐⭐⭐⭐⭐ 救球
022 甲基纤维素增粘 8% 母液 + 0.5-1% 工作液 + 起始 3 RPM 每日 +1 ⭐⭐⭐⭐⭐

🅥 第一部分: Demo 类型速查 (我 实战分类)

Demo 类型 时长 关键路径 必读 Protocol
A. 标准 7 天 Demo Day -1 → Day 7 低粘附微孔板 (009) + ClinoReactor 009 + 012 + 006 + 004
B. 短期 3 天 Demo Day 0 → Day 3 单细胞自组装 (008) 008 + 012 + 006
C. 长期 14-28 天 Demo Day -1 → Day 28 低粘附微孔板 + 长期培养 + 传代 009 + 007 + 005 + 012
D. 客户原代细胞 Demo Day -3 → Day 14 低粘附微孔板预筛 + 多条件 009 + 022 + 012 + 010
E. 共培养 Demo Day -1 → Day 14 共培养接种 011 + 009 + 012

🅥 第二部分: 客户必填信息 (Demo 前 1 周邮件微信必填)

# 信息项 用途 KB Protocol 来源
1 细胞类型 + 物种 (人源 / 鼠源) 决定培养基 + 起始 RPM 008 §Reagents
2 培养基配方 (客户 2D 用的培养基品牌 + 添加剂) 至少前 3 天不换 008 §Additional
3 2D 传代比例 + P 代次 (P 越年轻越好, <15 优先) 决定 3D 接种密度 002 §1
4 研究目的 (药筛 / 类器官 / DILI / 毒性 / 共培养) 决定终点指标 + Protocol 路径 (008/009/014/011) 001 §2
5 预期时长 (3 天 / 7 天 / 14 天 / 28 天) 决定 demo 是哪条 SOP 001 §10
6 客户 2D 痛点 (现有什么问题) 后续对比话术 + 我 价值点 Skill §1.1
7 NDA 状态 (是否已签) 决定技术细节开放程度 我 销售流程
8 细胞到达日期 + 运输方式 (干冰 / 常温) 决定接样安排 002 §1
9 客户对照片 / 录像许可 决定 demo 数据能否入 我 PPT Skill §1.1

客户 Demo 准备表 (微信发给客户)

📱 客户 Demo 准备表 (9 项必填)
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
1️⃣ 细胞类型 + 物种:____________
2️⃣ 培养基品牌 + 添加剂:____________
3️⃣ 2D 传代比例 (1:N) + 当前 P 代次:____________
4️⃣ 研究目的:____________
5️⃣ 预期 demo 时长:____________
6️⃣ 2D 痛点:____________
7️⃣ NDA 状态:____________
8️⃣ 细胞到达日期 + 运输:____________
9️⃣ 拍照录像许可:____________
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
⚠️ 客户细胞活力 (Trypan Blue) 必须 >90%
⚠️ 客户细胞汇合度必须 70-80%
⚠️ 客户细胞运输必须保留冰袋 + 温度记录

🅥 第三部分: 客户必带物品 (Demo 当天带到 我 实验室)

# 物品 规格 / 数量 KB Protocol 来源 客户可提供 / 我 备
1 细胞 (P<15 代) 70-80% 汇合度, 1 × T25 / T75 flask 002 §1 客户必带
2 客户原培养基 + 添加剂 (够 3 天用) 50 mL × 2 008 §Reagents 客户必带
3 客户 TrypLE / Trypsin (客户的消化酶) 5 mL × 1 008 §Step 1 客户必带 (避免客户适应问题)
4 客户 PBS + DMSO 各 50 mL 008 §Reagents 客户必带
5 客户细胞冻存液 + 冻存管 1 mL × 5 002 §1 客户必带 (备份)
6 客户细胞背景资料 (passage 记录 + STR 验证) 1 份 PDF 002 §1 客户必带
7 客户培养基检测报告 (我方助 pH / osm / 葡萄糖检测) 1 份 我 备 我 备
8 生物安全柜 + 二氧化碳培养箱 + 离心机 + 显微镜 — 008 §Equipment 我 备 (已就位)
9 ClinoStar + ClinoReactor + 低粘附微孔板 (Kugelmeiers) — 008/009 我 备 (已就位)

我 备的"应急小瓶" (Skill §1.3 实战铁律)

我 这边永远备:
✅ 3 个预培养的 HepG2 球体 (Day 7 标准对照) — 客户细胞失败时救场用
✅ 2 个 MCF-7 球体 (Day 14) — 同上
✅ 1 张 Live/Dead 染色图 (绿色活细胞为主) — 客户看到数据立即信任
✅ 1 张 2D vs 3D CYP3A4 5-7× 对比图 — 客户做毒筛必看

🅥 第四部分: 我 必查"4 件套" (Demo Day 0 必跑检查)

□ 1. 客户细胞活力 (Trypan Blue) → 必须 >90% (008 §Reagents)
□ 2. 客户细胞汇合度 → 必须 70-80% (002 §1)
□ 3. 客户培养基颜色 + 透明度 → 必须无浑浊 (002 §1)
□ 4. 客户细胞形态 (显微镜下) → 必须形态正常 (002 §1)

⚠️ 任一不过 → Demo 推迟 24-48h, 重新培养。强行 demo = 必然失败 + 客户失去信心。


🅥 第五部分: 客户现场必做 (Demo Day 0 现场操作)

# 步骤 时长 KB Protocol 来源 谁做
1 客户介绍 + 实验室参观 (30 min) 30 min Skill §2.1 我 引导 + 客户自我介绍
2 客户细胞接样 + 显微镜下检查形态 15 min 002 §1 我 接样 + 客户确认
3 客户细胞 70-80% 汇合度验证 (拍照) 5 min 002 §1 我 拍照记录
4 客户 TrypLE 消化 (客户的酶 + 客户的温度 + 客户的时间) 20 min 008 §Step 1 我 指导 + 客户操作
5 客户细胞计数 + 活力检测 (Trypan Blue + 自动计数仪) 15 min 008 §Step 2 我 监督 + 客户实操
6 70 μm 过滤单细胞 (你 24h 救法必备) 10 min 013 我 操作
7 单细胞悬液稀释到 1 × 10⁶ total / 5 mL 装载 10 min 008 §Step 5 我 + 客户计算确认
8 装 ClinoReactor (008 路径 5 mL / 009 路径 2-3 mL) 15 min 008 §Step 4-14 / 009 §Fill ClinoReactor 我 操作 + 客户观察
9 ClinoStar 设置 + 起始 RPM 3-6 5 min 012 我 操作 + 客户记录
10 客户午餐 + 设备现场答疑 30 min Skill §2.1 我 答客户

🅥 第六部分: 客户必问 8 个问题 (我 实战必问清单)

# 问题 用途
1 "您客户的细胞在 2D 培养多久了?现在 P 几代?" 决定 demo 时长 + Protocol 路径
2 "您之前做过 3D 培养么?用什么方法 (悬滴 / 低粘附板 / Matrigel)?" 决定客户预期管理 + 难度评估
3 "您期望 3D 球体大小是均匀还是不均匀?" 走 008 还是 009
4 "您客户的研究目的是药筛、类器官建模还是 DILI 毒性?" 决定加药时间 + 终点指标
5 "您客户的细胞是原代细胞还是细胞系?" 决定风险等级 + 备援细胞
6 "您想看球体的形态学 (明场) 还是功能学 (Live-Dead / ATP)?" 决定是否需要染色 + 染色时机
7 "您期望 demo 出数据是 Day 7 还是 Day 14 还是 Day 28?" 决定 demo 路径 + 客户汇报时间
8 "您需要 demo 期间实时照片 / 视频给老板汇报么?" 决定 我 客户日报格式

🅥 第七部分: 客户必讲 5 大卖点 (我 实战话术)

1. ClinoStar 设备原理 + 微重力 (gravity vector < 1g)
2. 3 大路径可选:008 自组装 / 009 低粘附微孔板 / 014 海藻酸钠包埋
3. 客户原代细胞可保留 TME + 异质性 (优于细胞系)
4. 18 天恢复 in vivo 功能 (HepG2/C3A 实战数据, 001 §11)
5. 救球 3 件套:006 + 013 + 022 (我 实战总结)

🅥 第八部分: 客户必签 7 件文档 (Demo 当天)

文档 用途 谁签
设备使用确认书 客户确认 CelVivo 设备使用合规 客户 + 我
细胞样品处理同意书 客户细胞 我 仅用于 demo, 不做他用 客户 + 我
NDA 双向保密协议 (如未签) 双方技术细节保密 客户法人 + 我 法人
数据归属确认书 Demo 数据归客户, 我 仅做演示 客户 + 我
Demo 报价单 Demo 服务费 + 后续设备报价 客户 + 我
客户回访问卷 客户对 我 demo 的反馈 客户 (匿名)
客户案例授权书 我 是否能用客户 demo 案例做后续宣传 客户 (可选签)

🗓️ 第九部分: A. 标准 7 天 Demo 时间表 (我 实战推荐)

📅 Day -7 (Demo 前 1 周) — 接样准备

时间 任务 Protocol 关键检查点
09:00 客户信息收集表 (5 项必填) Skill §1.1 细胞类型/培养基/P 代次/2D 痛点/客户预期
09:30 预订试剂: Kugelmeiers Spherical 5D 96 孔板 (009 必备) 009 Reagents 货号、ETA
10:00 预订 PluriSelect 100 + 400 μm 细胞筛网 (013 救球) 013 Reagents 货号 43-50100-51
10:30 预订 甲基纤维素 (Sigma M7027, 15 cP) (022 备) 022 Reagents 货号
11:00 客户 2D 培养 (我 这边代培养 3-5 天) 002 70-80% 汇合度

📅 Day -1 (Demo 前 1 天) — ClinoReactor + 低粘附微孔板准备

时间 任务 Protocol 关键数字
09:00 ClinoReactor 准备 (5-6 mL 装载) 003 + 010 Biofloat 涂膜 + 25 mL 无菌水 hydrate beads + 4h 等
13:00 低粘附微孔板预聚球 (009 路径) 009 1000 cells/well + 100 × g 离心 3 min + 37°C 过夜
14:00 0.5% 甲基纤维素母液备 (022 防聚团) 022 8% 母液 → 0.5% 工作液 (12 mL 培养基 + 750 μL 母液)
15:00 客户日报格式准备 (我 邮件/微信) Skill §3.2 含图 + size 测量

📅 Day 0 (Demo 当天) — 客户到场 + 装载

时间 任务 Protocol 关键操作
09:00 客户到达 + 设备原理讲解 Skill §2.1 30 min 介绍
09:30 客户细胞处理 008 Step 1-2 TrypLE 单细胞悬液 + 计数 + 活力检测
10:30 70 μm 过滤单细胞 (013 防聚团) 013 PluriSelect 100 μm 必过
11:00 装 ClinoReactor (5-6 mL, 1-2 × 10⁶ total) 008 Step 4-5 我 上次用 13 × 10⁶ 是 13 倍过高!
11:30 ClinoReactor 装载 (从低粘附微孔板转入 009 路径) 009 Step 8-15 2-3 mL 装载
12:00 ClinoStar 设置 012 起始 RPM:3-6 (我 上次 8 偏高)
12:30 客户午餐 + 设备现场答疑 Skill §2.1 —

📅 Day 1-2 — 早期观察 + 首换液

时间 任务 Protocol 关键
08:30 明场观察 + 拍照 Skill §3.1 size 分布记录
09:00 判别是否首见聚球 (500 cells) 012 Day 1-4 出现
09:30 Day 2 首次换液 (48h) 008 Step 17 + 004 5-6 mL 吸出 → 5-6 mL 新鲜
10:00 RPM 调整 012 Day 2 = 5-10 RPM

⚠️ Day 1-2 必查项目 (大聚球救火窗口)

🔍 显微镜下判别:
□ 大聚球 (>200 μm)? → 立刻走 Protocol 006 Gardening + 013 过滤
□ 单细胞残留多? → 加 0.5% 甲基纤维素 (022)
□ 气泡? → 轻拍 + 倾斜
□ 污染? → 立即丢弃 + 拍照记录

📅 Day 3-5 — 球体成熟期 + 救球窗口

时间 任务 Protocol 关键
08:30 明场观察 + 拍照 012 Figure 1 看 size 分布
09:00 Day 3: Gardening (006) 006 P200 tip 移除不规则聚球
09:30 Day 5: 低粘附微孔板路径到达"Optimal" 012 Figure 1 "After day 5 with microwell plate aggregation"
10:00 RPM 调整 (Table 1) 012 Day 3 = 7-13, Day 5 = 10-16

📅 Day 6-7 — 加药窗口 + 客户首汇报

时间 任务 Protocol 关键
08:30 观察 + 拍照 012 球体大小稳定
09:00 Day 6: 加药 / Live-Dead 染色 PMC12730618 Calcein AM + BOBO-3
10:00 Day 7: 客户首汇报 + 拍照 PPT Skill §3.2 我 客户汇报 PPT
14:00 客户现场答疑 + 数据讨论 Skill §1.1 —

📅 Day 8-14 — 球体成熟 + 长期数据

时间 任务 Protocol 关键
Day 8-10 首换 ClinoReactor (007 Transferring) 007 新 ClinoReactor + 4-5 mL 装载
Day 10 首分裂 (005 Splitting) 005 4 mL 新装载 + 拆分多瓶
Day 14 球体成熟 (成熟 = "Round spheroids") 008 Step 19 3 周 (~21 天) 成熟

📅 Day 15-28 — 长期培养 + 收数据

时间 任务 Protocol 关键
Day 15-21 球体成熟期 008 Step 19 "similar-sized, round spheroids"
Day 18 HepG2/C3A 18 天恢复 in vivo 功能 007 客户报告可引用
Day 21 球体成熟 008 size 稳定 + 形态圆
Day 28 完整 demo 数据整理 + 客户 PPT Skill §3.2 —

🚨 第十部分: 4 种客户类型差异化 Checklist (我 实战分类)

🅥 类型 1: 药企 (大客户, 4 周 demo)

□ 客户 KAM 关系建立
□ NDA + 试剂详情沟通
□ Day -3: 客户原代细胞预筛 (3 浓度 × 3 培养基)
□ Day -1: 低粘附微孔板预聚球 (009 + 022 防聚团)
□ Day 0: ClinoReactor 装载 (1-2 × 10⁶ + 5-6 mL)
□ Day 1-14: 每日观察 + RPM 调整 (Table 1)
□ Day 7: 中期报告 (PPT + 拍照)
□ Day 10: Splitting (005)
□ Day 14: 长期培养 + 收数据
□ Day 21: 球体成熟
□ Day 28: 完整 demo PPT + 报价 (5 大参数 + ROI)
□ 后续: 跟进 + 续单

🅥 类型 2: 学术 PI (中客户, 2 周 demo)

□ 客户 PI 文献背景调研 (PMC + PubMed)
□ Day -1: 低粘附微孔板预聚球 (009)
□ Day 0: ClinoReactor 装载 (1 × 10⁶ + 5 mL)
□ Day 1-7: 每日观察
□ Day 7: 首汇报 (Live-D 染色 + size 数据)
□ Day 10: 球体成熟 + 客户讨论下游应用
□ Day 14: 完整报告 + 仪器报价 + 共一文章 offer
□ 后续: 售后技术支持

🅥 类型 3: Biotech / CRO (中客户, 1 周 demo)

□ 客户应用场景明确 (药筛 / DILI / 类器官)
□ Day 0: 直接 ClinoReactor 自组装 (008)
□ Day 1-3: 早期观察 (决定 demo 命运)
□ Day 5: 中期数据
□ Day 7: 最终 PPT (size + Live-D + 客户应用建议)
□ 后续: 平台报价 + 培训

🅥 类型 4: CDMO 工业客户 (战略大客户, 4 周 demo + 多项目)

□ 客户管线分析 + 多细胞类型 demo 计划
□ Day -7: 多细胞类型 + 多 ClinoReactor 准备
□ Day 0: 共培养 (011 HepG2/LX-2 90/10) + 客户细胞类型
□ Day 1-7: 每日观察 + 救球预案
□ Day 14: 中期报告 (多细胞对比 + 数据 PPT)
□ Day 28: 完整 demo + 平台报价 + 长期合作框架
□ 后续: 季度技术培训 + 应用支持

🚨 第十一部分: Demo 失败应急 SOP (我 实战高频)

案例 A: 客户细胞成球困难 (24h 无可见聚球)

诊断: TrypLE 消化过度 / 死细胞过多 / 起始密度过低
救法:
1. 检查单细胞悬液活力 (Trypan Blue) → 必须 >90%
2. 提升起始密度 (1 → 2 × 10⁶)
3. 加 0.5% 甲基纤维素 (022)
4. 跑对照:客户 2D 直接种 ClinoReactor (无 TrypLE)

案例 B: 大聚球 + 不均一 (你 24h 实战问题)

诊断: 起始密度过高 + RPM 偏高 + 跳低粘附微孔板
救法 (按优先级):
1. **立刻走 Protocol 006 Gardening** (P200 tip 移大球)
2. **加 0.5% 甲基纤维素** (022, 防继续聚团)
3. **70/100 μm 过滤** (013, 留下均一球)
4. **加新 ClinoReactor** (007, 重启)

案例 C: 客户细胞死亡 (污染 / 凋亡)

诊断: 镜下浑浊 / 颜色变化 / pH 异常
救法:
1. 立即拍照 + 记录
2. 备份样品 (留作分析)
3. 重新启动 demo (Day 0 重做)
4. 客户沟通: 备 3 个预培养 HepG2/MCF-7 应急球体 (Skill §1.3)

案例 D: 客户中途改条件

诊断: 客户临时改密度 / 培养基 / 加药时间
救法:
1. 暂停当前 demo
2. 用 Protocol 009 低粘附微孔板预筛新条件
3. 48h 内反馈客户预筛结果
4. 决定继续原 demo 或重启

📊 第十二部分: Demo 关键数字速查表 (我 实战话术)

🎯 自组装 (Protocol 008)

项 数字
装载体积 5-6 mL
起始总数 1-2 × 10⁶ total
起始 RPM 3-6
首换液 48-72h
首见聚球 1-4 days
球体成熟 ~3 weeks
HepG2/C3A 18 天 恢复 in vivo 功能

🎯 低粘附微孔板 (Protocol 009)

项 数字
低粘附微孔板 Kugelmeiers Spherical 5D / AggreWell 400
每孔密度 1000 cells/well
离心 100 × g, 3 min
培养 37°C 5% CO₂ 过夜
转入 ClinoReactor 2-3 mL
转入后 RPM 6-9

🎯 转速 (Protocol 012 Table 1)

Day Single cell RPM Microwell RPM
0 3-6 —
1 5-10 5-10
2 5-12 5-12
3 7-13 7-13
4 7-15 7-15
5 10-16 10-16 (optimal))**
6 11-16 11-16
7 11-16 11-16
8 13-20 13-20
9 13-20 13-20
10 15-21 15-21
14 15-22 15-22
21 16-25 16-25

🎯 救球 (Protocol 006/013/022)

救球工具 何时用 关键数字
006 Gardening 早期不均一 (Day 1-5) P200 tip 移大球
013 过滤 大聚球过多 (Day 1-7) 100/400 μm PluriSelect
022 甲基纤维素 防过度聚团 0.5-1% 工作液 + 8% 母液
007 Transferring Day 10 换 ClinoReactor 4-5 mL 装载
005 Splitting Day 10 分裂 4 mL 装载 + 拆分多瓶

🎯 换液节奏 (Protocol 004)

HepG2/C3A 示范周期:48h / 48h / 72h / 48h / 48h / 72h
其他细胞:every 2 days 起步, 按客户细胞调

✅ 第十三部分: Demo 启动前最终 Checklist (我 5 件套)

□ 1. 客户信息 5 件套 (细胞类型 / 培养基 / P 代次 / 2D 痛点 / 客户预期)
□ 2. 试剂预订 3 件套 (Kugelmeiers 低粘附微孔板 + PluriSelect 筛网 + 甲基纤维素)
□ 3. ClinoReactor 准备 (Biofloat 涂膜 + 25 mL 无菌水 hydrate + 5-6 mL 装载 + 4h 平衡)
□ 4. 客户 2D 培养 (70-80% 汇合度)
□ 5. 应急球体备份 (HepG2 Day 7 + MCF-7 Day 14)

📌 第十四部分: 实战 10 大教训 (9-01 实战沉淀)

# 教训 铁律
1 密度过高是大聚球主因 单细胞总 = 1-2 × 10⁶, 不超 2.5 × 10⁶
2 RPM 偏高加剧不均一 Day 0 = 3-6 RPM, 绝不直接上 8+
3 跳低粘附微孔板 = 必然不均一 想要均一,必走 Protocol 009 低粘附微孔板预聚球
4 不换液 = 营养枯竭 48h 首换液 不能拖
5 首见聚球 1-4 天是正常的 9h 出大聚球 = 过早 + 密度过高
6 救球 3 件套:006 + 013 + 022 任何时候不均一,用这3 个
7 客户细胞死亡 = 立即备份 永远留 HepG2 应急球体 (Skill §1.3)
8 客户中途改条件 暂停 + 009 预筛 + 48h 内回复
9 数据 PPT 必含 size 分布图 Day 7/14/21 客户 PPT 必备
10 客户 PI 文献背景必读 PMC + PubMed 5 篇再报价

💡 第十五部分: 我 实战话术 (给客户讲)

"CelVivo ClinoStar Demo 我有完整的 5 种客户类型 SOP + 7 天到 28 天完整日程 + 救球 3 件套 (006 Gardening + 013 过滤 + 022 甲基纤维素)。最关键的 4 个数字:1-2 × 10⁶ total cells / 5-6 mL 装载 / 3-6 RPM 起始 / 48h 首换液。想要均一球体必须走 Kugelmeiers Spherical 5D 低粘附微孔板预聚球。"

"客户来 Demo 现场必带 9 件套 + 必填 9 项信息 + 必签 7 件文档。我 这边必查 4 件套 (活力 >90% / 汇合度 70-80% / 培养基透明 / 形态正常),必带 应急小瓶 (HepG2 + MCF-7)。缺一不可,任一不过 → demo 推迟 24-48h。"


实战汇总: 本手册整合 CelVivo KB 13 份 Protocol 实战数据 + 前列腺癌 14 篇文献 KB + celvivo-demo-optimization skill 9-1 实战铁律。我 实战核心 = 密度不超 2.5 × 10⁶ / 起始 3-6 RPM / 跳低粘附微孔板必救 / 48h 首换液 / 救球 3 件套 006 + 013 + 022。🧠⚡