Femtobiomed CellShot 分区流式电转染系统 — 完整产品技术白皮书
转发语：Femtobiomed CellShot 平台以独创的 PFEP（分区流式电穿孔）技术，实现"三无一高"——无需细胞洗涤、无需 EP 缓冲液、无细胞损伤，转染效率高达 97.1%（原代 NK），细胞活力 96.7%，且已获得美国 FDA DMF 注册（MF 30803），是目前全球唯一无需 EP 缓冲液的电转染商业化系统。
文档一：Femtobiomed KONEX IR 2025 下半年路演材料（27 页）
第 1 页
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：封面
非破坏性场流电转染技术
用于 CRISPR 基因编辑与 RNA 治疗代表理事 李相贤（Sanghyun Lee）
2025.11.15通过非破坏性场流电转染技术（Non-Destructive Field Flow Transfection Technology）实现下一代高效基因编辑及多重基因传递工艺革新
GMP 就绪 · FDA DMF 注册 · 可扩展制造
KONEX IR 2025 下半年
三大平台：PFEP · Proliva · Cryoliva
第 2 页：序言 — 新药的发展阶段
新药的发展历程
代际 类型 特点 局限 1 代 化学药物（Chemical Drug） 传统化学药品 新候选物质瓶颈 2 代 大分子生物药（Large Molecule） 高分子生物药品、抗体靶向治疗 应对癌症和罕见病能力有限、高成本生物工艺 3 代 细胞治疗（Cell Therapy） 细胞基因治疗剂、细胞基因操作治疗 从根源治疗癌症和罕见病、超高成本细胞基因工艺 第一次抗癌计划（Cancer Moonshot）→ 第二次抗癌计划（Moonshot Re-Ignition）
"第二次抗癌计划是 2022 年拜登政府启动的，旨在克服难治性疾病治疗瓶颈，发展新药模式——特别是细胞·基因治疗剂——以征服癌症的国家级构想。"
第 3 页：序言 — 第三代细胞基因治疗剂（CGT）
基因编辑技术对比
病毒载体（Viral Vector） 非病毒技术（Non-Viral） Knock-In（新基因插入） ✅ 非常高的插入效率 ❌ 插入效率低于病毒 Knock-Out（疾病基因删除） ❌ 无法删除基因 ✅ 只有非病毒技术可删除 安全性 ❌ 随机插入风险 ✅ 仅编辑目标基因，高安全性 病毒载体：CGT 基因工程的先驱，但只能插入基因
CRISPR 等（2018 年起）：可删除和插入基因，驱动未来 CGT 新药市场爆发
EP：电穿孔法（Electroporation），通过电场将物质传递到细胞内的方法
第 4 页：序言 — 非病毒基因传递体系
CRISPR + EP：基因删除/插入 → 永久性基因编辑
RNA + EP：基因表达/抑制 → 暂时性基因导入
核心课题——提高编辑效率：
- 提高删除效率
- 提高插入效率
- 复合基因编辑技术
快速简便的大规模处理需求：
- 敏感 RNA 物质的有效工艺
- 克服短暂表达的工艺
- 大规模处理及工艺成本现实化
EP：电穿孔法（Electroporation），通过电场将物质传递到细胞内的方法
第 5 页：企业使命与愿景
使命（MISSION）
塑造非病毒细胞工程的未来——将细胞工程推进为可扩展的疗法
以创新的无损伤、可扩展、可靠的转染技术赋能细胞工程
愿景（VISION）
引领非病毒细胞工程时代
确立 CellShot 为全球非病毒细胞工程的行业标准，塑造先进疗法的未来
核心洞察（CORE INSIGHT）
电转染技术是最有效传递细胞内遗传物质的技术，但同时也是对细胞造成最大损伤的技术。因此，Femtobiomed 的目标是开发在不引起细胞损伤的同时，有效传递细胞内遗传物质的技术体系。
第 6 页：电转染基因工艺的未满足需求与 CellShot 平台
CellShot PFEP + Proliva + Cryoliva
无损伤电转染与低 DMSO 冻存保存工艺
电转染基因传递技术：
优势 劣势 非常有效的传递 细胞损伤严重发生 无需内吞体逃逸 发热导致细胞损伤 精细的传递控制 线粒体膜电位丧失 终极目标：开发无损伤电转染技术
三大突破方向：
- ✅ 热损伤解决
- ✅ 线粒体膜电位保护
- ✅ 无 DMSO 冻存保存
第 7 页：CellShot PFEP 超高速冷却解决热损伤问题
CellShot PFEP™ 实现无热损伤电转染
大幅增加电场有效时间，实现高分散复合传递性能
CellShot PFEP™——超高速散热，零温升：
- 初始温度 23°C，施加 100kV/m、1 GW/m³ 电场，温度几乎不上升
CellShot PFEP™ 分离流电转染技术：
在基于电转染的核酸遗传物质有效传递的同时，通过高分散复合传递实现对电转染难以传递的中性物质的有效传递。这种基于层流的微流传递结构实现了高散热结构，提供无热损伤的电转染传递。
CellShot nPFEP 机制：
原生模式（Native-mode, nPFEP）：
- 无需细胞洗涤
- 无需缓冲液交换
- 无需将遗传物质与细胞预混合
- 简化工作流程
- 可直接用 Leukopak 进行床边/院内 RNA 传递
混合模式（Mixed-mode, mPFEP）：
- 使用 Proliva 缓冲液交换
- 遗传物质混合后传递
- 基因传递效率提高 5-10 倍
- 维持细胞活力和增殖
- 适用于 CRISPR、RNA 等高效基因组编辑
第 8 页：mPFEP × Proliva 平台
CellShot Proliva 技术实现创新的电转染后增殖提升
产量(t) = 存活率(t) × 效率(t) × 增殖率(t)
增殖率 k = (1/t) × ln(Nt/N₀)
kc：对照组增殖率
✅ CellShot PFEP 技术解决热损伤，Proliva buffer 保护线粒体膜电位，将电转染后降至 50% 水平的细胞增殖率恢复至 90% 以上，接近几乎无细胞损伤的电转染技术
✅ Proliva buffer 的细胞器保护成分在冻存时也具有细胞保护功能，可与无 DMSO 的 Cryoliva 冻存保存工艺整合
✅ 低浓度 DMSO 冻存的整合是实现 RNA 基础细胞治疗剂和 NK 治疗剂等多剂量治疗剂的核心
CellShot Proliva — 细胞器无损伤技术（Organelle-Damage-Free Technology）
第 9 页：CellShot nPFEP × Proliva — 两阶段双重 mRNA 传递
2 阶段双重 mRNA 传递（eGFP/24 小时/mCherry）配合 Proliva
指标 24 小时 48 小时 双重转染细胞活力（Proliva） 95.4% 95.5% 双重转染细胞活力（DPBS 对照） 94.4% 86.5% 48 小时 Proliva 组细胞活力显著高于 DPBS 对照组（95.5% vs 86.5%）
双表达图：eGFP+mCherry 在 DPBS 和 3-Proliva 中的表达对比
第 10 页：CellShot nPFEP × Proliva — 双重 mRNA 传递
双重 mRNA 传递（eGFP+mCherry）配合 Proliva
对照组 vs #1 / #2 / #3
观察 24 小时、48 小时、72 小时的表达持续性
第 11 页
：BD-2 CellShot CAR-T
CellShot CRISPR-KO + CellShot iCAR-mRNA 用于 CAR-T（NK）
双重转染 CRISPR KO + RNA 工程配合低 DMSO 冻存保存
✅ 目前 CAR-T 治疗剂为确保对实体瘤的疗效和开发异体治疗剂，使用 CRISPR 的基因删除已成为必需因素
✅ 通过病毒载体插入 CAR，用 CRISPR 删除 PD-1、TRAC 等基因，CRISPR-KO 效率的提升变得非常重要。在 T 细胞周期的半个周期内传递两次 CRISPR RNP，可大幅提高删除效率，这是核心工艺
✅ 此外，通过 RNA 传递赋予 on-target off-tumor 抑制功能，并可整合 Cryoliva 低 DMSO 冻存保存
第 12 页：下一代 CAR-T 多基因实体瘤靶向策略
下一代 CAR-T 治疗通过病毒载体永久插入关键治疗基因、CRISPR 永久删除抑制靶点、同时用 RNA 补充瞬时表达和沉默方法。这种组合设计旨在最大化抗肿瘤活性的同时，通过低 DMSO 冻存保存将自身免疫和其他不良反应降至最低。
癌症类型 病毒插入（永久） CRISPR KO（永久） RNA 表达附加（瞬时） RNA 沉默附加（瞬时） 备注 B-ALL/B-NHL CD19 CAR PD-1 KO / TRAC KO c-JUN, CXCR2（归巢） siTIGIT, siLAG3 血液恶性肿瘤：抗原+耗竭是优先项。异体设置倾向 TRAC KO 多发性骨髓瘤 BCMA 或 GPRC5D CAR PD-1 KO / TRAC KO c-JUN, dnTGFβR2, CXCR2 siTIM-3, siA2aR（ADORA2A） 骨髓微环境→TGFβ 和 IL-8 抑制至关重要 T 细胞恶性肿瘤（T-ALL） CD7 CAR CD7 KO（必需） c-JUN, CXCR2 siPD-1（或 CRISPRi）, siTIM-3 防止自相残杀需 CD7 KO AML（CD33/CD123/CLL-1） 靶点 CAR PD-1 KO / TRAC KO CXCR2（骨髓归巢）, dnTGFβR2 siA2aR, siLAG3 AML 微环境需 IL-8/CXCR2 和 TGFβ 轴干扰 肝细胞癌（HCC） GPC3 CAR PD-1 KO / TRAC KO CXCR1/2, dnTG
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FβR2 | siTGFβ1/2, siA2aR | 实体瘤默认：浸润（CXCR1/2）+ TGFβ 阻断 |
| 胰腺癌/卵巢癌/TNBC | Mesothelin CAR | PD-1 KO / TRAC KO | CXCR1/2, c-JUN | siTIGIT, siLAG3 | IL-8 丰富 TME → CXCR1/2 + c-JUN 抗耗竭 |
| 胃癌/胰腺癌（CLDN18.2） | CLDN18.2 CAR | PD-1 KO / TRAC KO | CXCR2, dnTGFβR2 | siTIM-3 | 增强浸润 + 瞬时 TGFβ 抑制，无需永久编辑 |
| 胶质母细胞瘤（GBM） | EGFRvIII 或 IL13Rα2 CAR | PD-1 KO / TRAC KO | dnTGFβR2, CXCR1/2 | siA2aR | 强免疫抑制 TME → 瞬时 TGFβ 阻断 + 归巢增强 |
| 神经母细胞瘤/肉瘤（GD2） | GD2 CAR | PD-1 KO / TRAC KO | CXCR2, c-JUN | siTIGIT | 早期浸润和持久性支持 |
| 头颈鳞癌/上皮癌（B7-H3/CEA/EpCAM） | 靶点 CAR | PD-1 KO / TRAC KO | CXCR1/2, dnTGFβR2 | siLAG3, siTIM-3 | 上皮肿瘤常依赖 IL-8/TGFβ 轴 |
第 13 页：CellShot nPFEP — mRNA CAR-NK 概念验证
CA19-9-CAR-NK
✅ 原代 NK 细胞 CA19-9-CAR-NK 转染实现 96% 高活力
✅ 原代 NK 细胞 CA19-9-CAR-NK 转染实现 97% 高效率
指标 数值 SD 转染后活力 96.7% 0% Day 3-7 效率 97.1% 1.4% NK 细胞系连续转染：
传递序列 GFP+ CD19-CAR 第一次：eGFP-mRNA，第二次：CD19-CAR-mRNA 83.47% ± 0.06 67.57% ± 1.06 双转染效率： 57.0% ± 0.98
第 14 页：CellShot nPFEP × Proliva — 单阶段 mRNA 传递
浓度递增实验
eGFP 转染效率（24 小时） 对照组 95.09% #1-1（1μg，第一次） 96.43% #1-2（1μg，第二次） 97.17% #2（10μg） 92.12% #3（50μg） 59.65% #4-1（100μg，第一次） 40.48% #4-2（100μg，第二次） 1.05% 细胞生长率（台盼蓝染色）：
条件 0h 24h 48h 72h 对照组 1x 正常增长 正常增长 正常增长 #1（90μJ，1:3） 1x 保持 保持 保持 #3（80μJ，1:3） 1x 保持 保持 保持
第 15 页：Proliva × Cryoliva 平台
CellShot Proliva + Cryoliva 工艺实现电转染后冻存保存
✅ 在 Proliva buffer 中完成电转染的细胞收集到含 Cryoliva 冻存保存悬浮液的收获注射器中
✅ 用细胞培养液稀释后培养 3-12 小时，恢复并让传递的 RNA 表达
✅ 之后更换为纯 Cryoliva 冻存保存悬浮液，进行冻存工艺
✅ Cryoliva 冻存保存悬浮液可根据细胞工艺优化，从 DMSO-free 产品到低浓度 DMSO 产品均可
完整工作流程：
- Proliva buffer 细胞准备
- CellShot mPFEP × Proliva 转染（RNA/CRISPR）
- CellShot Cryoliva 低 DMSO 冻存
- 质量控制（24 小时）
第 16 页：BD-1 CellShot CAR-NK
CellShot mPFEP + Proliva + Cryoliva 用于 RNA 工程 CAR-NK
RNA 工程与低 DMSO 冻存保存实现的 CAR-NK 疗法
✅ NK 细胞难以基因操作且体内存活时间短，核心策略是以快速低成本的工艺生产并反复给药。CellShot Proliva RNA 工艺与此吻合，配合 Cryoliva 低 DMSO 冻存保存工艺可实现无 DMSO 毒性的反复给药
NK 细胞大规模培养及供应（异体治疗基础）
CellShot Proliva RNA 工程配合低 DMSO Cryoliva
第 17 页：下一代 CAR-NK 实体瘤多靶点策略
癌种 一级靶点（必需） 二级/三级靶点（可选） 浸润增强 TME 抗性增强 安全装置/备注 肝细胞癌（HCC） GPC3（AFP 表位） FAP（癌基质）、B7-H3、c-Met CXCR3（IFN-γ 诱导趋化因子↑）、±CXCR2 dnTGFβR2 mRNA, siADORA2A, mbIL-15 iCAR（HLA-I 正常表达时关闭）或 ADCC 并用（anti-GPC3） 胰腺癌（PDAC） Mesothelin（MSLN）、CEA FAP（CAF）、Claudin18.2 CXCR2（IL-8↑ 环境适用） dnTGFβR2, siADORA2A, mbIL-15 适配器 CAR 或 CD16a-S197P + anti-MSLN Ab 并用 胃癌/GEJ HER2, Claudin18.2 B7-H3, EPCAM CXCR2/3 并用 dnTGFβR2, mbIL-15 HER2 低表达正常组织保护建议 iCAR/密度门控 大肠癌（CRC） CEA, EPCAM B7-H3, Nectin-4 CXCR2（炎症性趋化因子） dnTGFβR2, siADORA2A, mbIL-15 肝转移靶点时追加 CXCR4（肝归巢） 非小细胞肺癌（NSCLC） EGFR（wt/过表达）、MUC1 B7-H3, PD-L1（适配器） CXCR2（IL-8↑） dnTGFβR2, siADORA2A EGFR 正常组织保护建议 iCAR 或适配器策略 三阴性乳腺癌（TNBC） Trop-2, EGFR B7-H3, Nectin-4 CXCR2 dnTGFβR2, mbIL-15 ADC（anti-Trop-2）与 ADCC 并用选项 卵巢癌 Mesothelin, FRα MUC16/CA125（适配器）、B7-H3 CXCR2/3 dnTGFβR2, siADORA2A, mbIL-15 腹腔内给药 + CXCR3 建议 前列腺癌 PSMA STEAP1, B7-H3 CXCR3 dnTGFβR2, mbIL-15 骨髓归巢时追加 CXCR4 黑色素瘤 GD2, MCSP（CSPG4） B7-H3 CXCR3（炎症性 TME） dnTGFβR2, siADORA2A 皮肤/神经毒性注意 → 建议 iCAR 脑肿瘤（GBM） EGFRvIII（高特异性） IL13Rα2, B7-H3 CXCR3 dnTGFβR2, mbIL-15 局部·鞘内给药 + 抗原异质性需多靶点 胆道癌/胰胆管癌 Claudin18.2, EPCAM B7-H3, MUC1 CXCR2 dnTGFβR2, siADORA2A 胆汁性炎症趋化因子谱适配 CXCR2 ✅ 多重靶点 CAR-NK 策略与 1) TME 抗性、2) 浸润增强、3) ADCC 特化、4) 持久力/代谢恢复（PGC-1α）相结合
✅ CellShot Proliva RNA + Cryoliva 低 DMSO 冻存保存工艺适合无 DMSO 毒性反复给药治疗剂开发
第 18 页：CellShot Suite — 五大核心模块完整解决方案
CellShot Suite 五大核心模块：
- CellShot Controller（控制器）— 自动化/封闭式
- CellShot Cartridge（一次性卡盒）— 传递耗材
- CellShot Proliva（缓冲液）— 高增殖率
- CellShot Cryoliva（冻存剂）— 低 DMSO 冻存
- CellShot Database（数据库）— cGMP 兼容
CellShot Database（www.cellshotdb.com）：
CellShotDB 是平台的数字主干，设计用于控制和管理控制器并将所有运营数据集中化。该数据库提供协议库、基因传递配方，以及电压、电流、温度、压力、工艺时间等工艺后 QC 数据。此外，通过可选模块支持项目管理、自动化 FACS 分析和高级分析功能，同时实现稳定的制造工艺控制和探索性 R&D 工作流程。
第 19 页：美国 FDA DMF 注册摘要
US FDA Drug Master File 认证（MF 30803）
项目 日期 说明 生物相容性（7 类） 2024.1.10 eCTD 格式 Drug Master 注册 设备 GMP 委托生产 2024.7 FCC-2210 Cartridge CoA 2024.7.31 FCC-3321 设备 CE 认证 2024.8.1 FCC-2310 注册完成时间线：
- 生物相容性 7 类 GLP 试验通过
- cGMP 委托生产
- 卡盒合格证（内毒素/EO 灭菌）
- 设备 QC 流程（HV/负载/冷却）
- 设备 GMP 委托生产
- FDA DMF 注册 LoA
第 20 页：广泛专利布局 — 已注册 46 件，申请中 71 件（商标 18 件注册）
CellShot 相关专利持续申请中
专利类别 内容 地区 CellShot PFEP（2022） 原生模式分区流式电穿孔、双层流传递、三层流传递、弯曲通道 PFEP 结构 美国、欧盟、韩国、日本、中国 CellShot Nano-Injector（16 件） 纳米注射器相关 - 超高速冷却（2024） 热损伤零传递、细胞器保护、mRNA/RNAi/CRISPR 多基因、低 DMSO 冻存整合 申请中 pH 控制传递（2024） pH 控制传递工艺 申请中 CellShot 高压放大器（2024） 高压放大器技术 申请中 CellShot 分配器（2024） 分配器技术 申请中 细胞工程工艺（2025） 正常组织梯度、靶向脱靶减少、CAR-T/NK 联合、合作模式 申请中 地区覆盖： 美国 1 件注册、欧洲 11 国各 1 件注册、日本 2 件、韩国 2 件
第 21 页
：Thank You!
感谢！
第 22 页：01 Ce
llShot Controller（控制器）
CellShot Badger-700D 控制器是为精密性、安全性和工作流程整合而设计的小型 GMP-就绪电转染装置。内置控制单元与 CellShot 数据库（Ce
!IR-第25页-图17
4](http://10.10.10.254:9898/f/33d265f1b8b34cad8f8d/?raw=1)
llShotDB）完全同步，自动执行预编程的基因传递协议。压力感应注射泵控制精密流量，QR 读取器识别每个卡盒，确保可追溯性和法规合规性。
为保护细胞质量，60W 珀尔帖冷却块和红外 T 传感器实时监测收获细胞，额外传感器追踪环境温度和湿度，HEPA 过滤循环维持无菌状态。此外，卡盒完全固定后高压连接才激活，确保安全，内部热风排出系统支持稳定的热控制和紧凑的一体化设计。
第 23 页：01 CellShot Controller — TMS 与 HVS
**TMS（温度管理系统）**在整个电转染过程中确保精密热控制。卡盒通过反馈控制式冷却块冷却，集成红外传感器直接监测收获细胞区。这种双重反馈设计即使在卡盒安装错误、异物或冷却异常情况下也能确保最佳热条件和稳定 QC。此外，TMS 通过 HEPA 过滤气流路径实时追踪卡盒周围的温度和湿度，维持敏感细胞样本的无污染状态。
**HVS（高压供应）**完全封闭，确保效率和用户安全。高压连接仅在卡盒完全安装固定后激活，使用户不暴露于物理危险中。内部循环系统稳定工作温度，外部空气经 HEPA 过滤后从装置手柄排出。这种结构实现了安全性、可靠性和功能性均衡的紧凑设计。
第 24 页：01 CellShot Controller — Turtle Dispenser
Turtle Dispenser是 CellShot Badger 装置的可选配件，实现电转染条件的高通量筛选。提供两种版本：
- Turtle-I：用于条纹型 96 孔板
- Turtle-II：用于 24+1 个标准 1 mL E 管
通过单个卡盒可对多样本使用不同传递参数直接分注到孔板或管中。条件可从验证的筛选库选择，或通过 CellShot Database 定制编程，满足各种研究需求。Turtle Dispenser 针对 R&D 优化，可高效执行电转染条件优化和快速多样本筛选。
第 25 页：02 CellShot Cartridge（一次性耗材）
CellShot Cartridge是一次性消耗品格式，确保无菌状态和 GMP 合规性。提供两种形式：
- 标准注射器型（3 mL、5 mL、10 mL）— 已在 FDA DMF 注册
- 大容量 Cell-Bag 型（2026 年上市）— 专为大规模制造设计
这种模块化结构支持从研究阶段到临床和商业生产的灵活扩展。
第 26 页：03 CellShot Proliva Buffer + 04 CellShot Cryoliva Freezing Agent
03 CellShot Proliva Buffer（缓冲液）
Proliva Buffer 是专为最小化高压传递过程中可能的热损伤和结构损伤而设计的细胞器保护电转染溶液。通过稳定细胞膜和保护线粒体等细胞器，电转染后始终保持高存活率、转染效率和增殖能力。此外，使用生物相容性成分和 FDA DMF 注册材料优化，为可扩展的非病毒基因传递工艺提供安全且 GMP-就绪的基础。
04 CellShot Cryoliva Freezing Agent（冻存剂）
Cryoliva Freezing Agent 结合低浓度 DMSO 和高浓度海藻糖（Trehalose）补充，提供卓越的冻存保护效果。这种独特配方降低了与传统冻存剂相关的细胞毒性风险，同时提高了冻融后细胞的存活率和功能性。此外，与 CellShot 工作流程完美整合，确保基因工程细胞的长期稳定保存，支持下一代细胞·基因治疗剂的持续制造和供应。
第 27 页：联系信息
01 一般咨询
- CellShot BD：Shinung Park, BD Director（su.park@femtobiomed.com）
- CellShot Sales：Seo Bong Chang, Sales Director（sb.chang@femtobiomed.com）
- 官网：www.femtobiomed.com
02 合作与开发
- Sanghyun Lee, CEO
- 邮箱：ceo@femtobiomed.com
03 美国销售与演示点
- San Diego 销售与演示点：Hemomics Inc.
- Byung Chul Kim（858.228.0693）
- 邮箱：bk@hemomics.com
文档二：Femtobiomed CellShot 综合产品宣传册（37 页）
第 1 页
：封面
非病毒细胞工程的全球领导者
细胞治疗剂生产核心工艺领先企业
2024.10.29
FEMTOBIOMED CELLSHOT
17 年 1 个专注
第 2 页：目录
Part 1. 细胞基因治疗剂（CGT）
- 市场、需求、竞争产品、技术及特长
Part 2. 认证及事业化
第 3 页：Part 1 标题页
细胞基因治疗剂（CGT）
- 市场、需求、竞争产品及特长
第 4 页：细胞基因治疗剂——增长最快的市场
生物药品各类型比例（按产品销售标准）
类型 产品比例 销售额比例 抗体药物 29.7% 51.1% 基因重组药物 53.3% 34.9% 疫苗 11.3% 12.5% 细胞基因治疗剂 5.7% 1.5% 合计 100% 100% 来源：World Preview 2022 outlook to 2028, Evaluate Pharma
市场规模及增长率（CAGR）：
类型 2020 2021 2022 2023 2024 CAGR 抗体药物 164.89 182.4 201.21 215.87 228.21 8.5% 基因重组药物 99.98 102.64 106.31 109.38 112.5 3.0% 疫苗 37.58 40.24 43.
3 | 46.42 | 49.72 | 7.2% |
| 细胞治疗剂 | 1.71 | 2.98 | 4.59 | 6.51 | 8.46 | 49.1% |
| 基因治疗剂 | 4.53 | 6.4 | 8.62 | 11.25 | 14.2 | 33.1% |
| 合计 | 308.69 | 334.66 | 364.03 | 389.43 | 413.09 | 7.6% |CGT：细胞与基因治疗
第 5 页：细胞基因治疗剂——增长最快的市场（续）
单位：十亿欧元
CGT 市场持续增长趋势图
第 6 页：行业痛点
自体 CAR-T 细胞治疗剂生产成本构成
高生产成本及由此导致的利润减少、产量扩大的困难及由此导致的销售上限
各传递体系的细胞治疗剂管线：
- 病毒载体单独使用
- 病毒载体增长
- 非病毒扩大
第 7 页：行业痛点（续）
新技术可以介入。非病毒基因表达技术可能能够绕过这个问题。
病毒载体导致的癌症风险（二次癌症风险）
为了克服 1) 抗原逃逸复发 和 2) 靶向脱靶毒性
癌症风险被认为源于用于传递细胞和基因治疗剂的病毒载体。对于 CAR-T 疗法，患者自身的 T 细胞被提取出来并进行基因改造。虽然病毒载体可以传递基因载荷，但当将遗传物质插入人体基因组时，也可能导致癌症。
第 8 页：非病毒基因传递技术
传递体系 临床产品 细胞物质混合 电转染类型 前处理细胞洗涤 适用场景 PFEP Femtobiomed CellShot（MF 30803） 未混合 EP 否 细胞系、异体制造 EP Thermo-Fisher CTS XENON 混合 EP 是 自体 mRNA-CAR 制造 EP Lonza Nucleofector 混合 EP 是 细胞系、异体制造 EP MaxCyte GTX（MF BB-10702） 混合 EP 是（自动） 治疗性疫苗
第 9 页：电转染基因传递商业化技术
FDA DMF 注册的电转染系统：
- Femtobiomed CellShot 系统（MF 30803）
- MaxCyte GTX 系统（MF BB-10702）
- Thermo-Fisher CTS XENON 系统
- Lonza Nucleofector 系统
除 Femtobiomed CellShot 系统外，所有系统均基于 EP 缓冲液
CellShot：无需 EP 缓冲液，无需细胞洗涤
第 10 页：传统混合传递方式 EP 系统的低工艺产量
细胞洗涤等前处理工艺中的细胞损失和损伤导致整体工艺产量降低
传统工艺：细胞洗涤（3 次）、EP 缓冲液交换、仅存活细胞与 mRNA 混合、EP 缓冲液电转染
高效率，但低产量
第 11 页：CellShot 分离传递技术的高产量
无需细胞洗涤，实现整个制造工艺的高产量
CellShot 工艺：任何培养基中的细胞直接输入、任何缓冲液中的 mRNA 输入、PFEP 电转染传递给所有细胞
无细胞损失，高效率，高产量
第 12 页：创新的分离传递技术
Re = rho U D / mu 小于 1
- 层流：不发生混合
- 细胞迁移至 mRNA 流
- RNase 不损伤 mRNA
传递力来源：1) 流线力 2) 离心力 3) 水动力
第 13 页
：最优秀的非病毒工艺——CELLSHOT PLATFORM
CellShot 平台 vs 传统 EP 系统
传统 EP
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系统：
- 细胞洗涤
- EP Buffer 交换过程
- 细胞流失（40% 以上）
- 细胞损伤
On-site CellShot Platform：
- 无需细胞洗涤
- 无需 EP Buffer
- 细胞直接在培养基中转染
关键 QC 指标对比：
CellShot 传统 EP 有效细胞数 O（确定） ?（不确定） 毒性 X（无） Delta（有） Key: Yield of TX（传递产量）
第 14 页：WHY CELLSHOT?
现有非病毒基因传递工艺的创新：3 无创新 - 3 大创新
3 无：
- 一无：传递缓冲液去除
- 二无：细胞洗涤去除
- 三无：毒性去除
3 大：
- 一大：生产产量创新
- 二大：制造成本创新
- 三大：多重基因传递创新
第 15 页：无毒性工艺的实现
在多种培养基和缓冲液中均保持高性能
现有混合传递中必需的 EP BUFFER 限制的唯一无束缚工艺技术
条件 转染效率 细胞活力 GM + EP OK OK GM + DPBS OK OK M + EP OK OK M + DPBS OK OK GM + Saline OK OK GM：生长培养基（+血清/完全培养基）；M：培养基（-血清/仅 1% p/s）；EP：电转染缓冲液；DPBS：无 Ca/Mg；Saline：0.9% NaCl
- 无需细胞洗涤，在培养液（或血液）状态下直接传递：最小化细胞损失和损伤，实现高产量
- 根据遗传物质特性应用最佳传递缓冲液：从 mRNA 到蛋白质均可优化
第 16 页：高产量和剂量依赖性及线性
高产量和传递浓度下的精确线性对制造 CMC 是巨大优势
剂量依赖性传递：
GFP 信号分布保持窄分布，接近正态分布，浓度低至 0.1 ug/ml。平均荧光强度（MFI）在低浓度域（0.1-10 ug/mL）呈线性增长，在高浓度域（10-400 ug/ml）呈对数增长。
产量对比：
有效细胞的效果持续时间：低剂量下的生产成本降低，通过 multi-dosing 策略克服（对比 CAR-T 的"二次癌症问题"）
第 17 页：实现多重靶点 CAR 免疫疗法制造的核心工艺技术
CRISPR 工程化 T 细胞治疗难治性癌症
来源：Edward A. Stadtmauer et al., Science 367, eaba7365 (2020)
基于 RNA 的细胞重编程向多能性
来源：Kogut et al., Nat Commun 9, 745 (2018)
唯一可实现多重基因传递的技术
肿瘤逃逸复发和脱靶毒性
来源：Xiao Han et al., Journal of Hematology & Oncology 12, 128 (2019)
CellShot 连续转染：
- 第一次 PFEP 传递
- 第二次 PFEP 传递
- 第三次 PFEP 传递
第 18 页：原代细胞中的高传递效率和存活率
在 EP BUFFER 脆弱的免疫细胞中也确保高产量
- 原代 PBMC-eGFP：效率 96%
- 人 NK 细胞-eGFP
- 原代 CA19-9-CAR-NK
第 19 页：高生产产量的 CAR-NK 制作实现
在人 NK 细胞系和原代 NK 细胞中确认高 CAR 表达
人 NK 细胞系内 CD19-CAR mRNA 转染：
- 与对照组相比，细胞存活率无显著差异（95.72%）
- CD19-CAR 表达率 60.88%
患者 NK 细胞内 CA19-9-CAR mRNA 转染：
- 高细胞存活率 96.7%
- CA19-9-CAR 表达率 97%
CA19-9：胰腺胆道癌等实体瘤中大量表达的靶点抗原之一
第 20 页：CD19-CAR-NK 的抗癌性能基础评估
高 CAR 表达率和细胞实验中的高抗癌性能确认
FEMTOBIOMED CELLSHOT 传递系统实现了高产量 CD19-CAR-NK 细胞生产：
- 86% (±1.51) 细胞为 Anti-FMC63-PE 阳性
- 细胞活力高达 93.56% (±0.75)
CD19-CAR-NK 细胞对 Nalm6 和 GA-10 细胞表现出显著高的细胞毒性。
与 Nalm6 癌细胞共培养 18 小时后：
- CD19-CAR-NK 共培养：80% 癌细胞死亡
- 未转染 hNK 共培养：39% 癌细胞死亡
第 21 页：实体瘤细胞治疗剂应用可能性
人 NK 细胞系中确认抗癌效果
- 体外：c-KIT-NK 对癌细胞（GIST）的杀伤能力确认
- 体内：c-KIT-NK 的抗癌效果确认
第 22 页：Part 2 标题页
2. 认证及事业化
第 23 页：美国 FDA 主文件注册完成
生物相容性（Biocompatibility）
- cGMP 适合性 GLP 试验完成：致敏/皮内/发热/急性/溶血性/细胞毒性/溶出物试验
- ISO 13485-2016 经营体系 cGMP 适合性认证完成（2024.1.10）
US FDA DMF 注册完成（2024 年 8 月 1 日正式注册）
A. US FDA Master Filing（cGMP 认证注册）的核心要求：
- 细胞工艺中引入的所有成分的毒性评估通过：7 种 GLP 试验通过
- 细胞工艺中介入的所有成分公开
- 竞争技术的毒性问题：细胞毒性强的 EP buffer 毒性评估通过的困难
- 竞争技术的成分困难：现有 EP 技术的核心秘诀 EP buffer 成分公开不易
B. CELLSHOT 技术所有成分均由安全物质构成：
- CELLSHOT 四大物质：玻璃、金、塑料（PC）、硅均为医疗认证物质
- EP buffer free 技术，无毒性大的溶液，cGMP 适合性非常高
CE Marking 2024
第 24 页：US FDA DMF REGISTRATION 摘要
项目 日期 生物相容性 7 类 2024.1.10 设备 GMP 委托生产 2024.7 cGMP 委托生产 2024.7.31 Cartridge CoA 2024.8.1 内毒素/EO 灭菌 - 设备 QC 流程 - 设备 CoA（HV/负载/冷却） - 设备 CE 认证 - eCTD 格式 Drug Master filing -
第 25 页：FEMTOBIOMED CELLSHOT SYSTEM
CELLSHOT BADGER-700 系列：US FDA DMF 注册的标准设备
CELLSHOT BADGER-700D（Cat. No. FCB-CD22）
组件 功能 红外 T 传感器 收获细胞监测 空气温度 环境追踪 空气湿度 环境追踪 QR 读取器 卡盒 ID 卡盒冷却珀尔帖（60W） 温度控制 压力感应注射泵 精密流量控制 嵌入式控制单元（配合 CellShotDB） 自动协议执行 HEPA 过滤空气循环 无菌维持 智能内部热风排出装置 稳定热控制 隐藏式高压连接 安全保障
第 26 页：承载分离传递技术的消耗性传递卡盒
US FDA DMR 注册的标准卡盒
Standard Scale Cartridge（Cat. No. FCC-3351）
- 材料注射器
- 收获注射器
- 实时红外温度监测
- 细胞注射器
- 细胞输入
- 材料输入
- 输出
- PFEP 技术
- 高压输入端子（用于电穿孔）
特性：
- FDA Drug Master Filed 系统（MF 30803）
- 新型分区流式电穿孔（PFEP）技术
- 无需细胞洗涤
- 自动化封闭式系统
- 卡盒冷却：60W 珀尔帖基
- FDA CFR 21 Part11 合规
第 27 页：CELLSHOT 产品线
从注射器基开发用产品到 Cell-Bag 基 GMP 设备的完整产品线
型号 时间 类型 冷却 FDA DMF 用途 BADGER-700 2023 注射器基小体积 60W 珀尔帖 已注册 MF 30803 研发、临床 BADGER-700 + TURTLE 2023 小体积 + 筛选附件 60W 珀尔帖 已注册 高通量 R&D 筛选 BADGER-II 2024 注射器基中体积 60W 珀尔帖 待注册 临床前、临床 MENORAH-7000 2025 Cell-Bag 基大体积 60W 珀尔帖 待注册 商业制造 3P-TUI 2023 注射器基小体积 无 未注册 首个商用 R&D 系统 通用特性：
- 吞吐量：10^5 至 10^8 细胞/分钟
- 自动化封闭式系统
- FDA CFR21 Part11 合规
第 28 页
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：CELLSHOT CARTRIDGE 产品群
2024-2025 标准规模和扩展规模产品线
型号 适配设备 说明 FCC-3351 BADGER-700 标准注射器型 FCC-2310 BADGER-700 标准型 FCC-3321 BADGER-II 扩展型 FCC-4310 MENORAH-7000 大容量型 FCC-5321 - - FCC-5351 - - FCC-332T TURTLE-I/II Turtle 适配 FCC-335T TURTLE-I/II Turtle 适配 SPL-38196 - - FCT-RA28 - - FCC-1E24 - - FCT-RA29 - -
第 29 页：广泛专利确保
已注册 46 件，申请中 71 件（商标 18 件注册）
- CellShot Platform 16 件
- 粘度测量-慢性疾病
- 游离脂肪酸诊断
- 纳米技术
- 接触角测量
- 超疏水加湿器
- 欧洲 11 国各 1 件注册
- 日本、韩国各 2 件共 4 件注册
- 美国 1 件注册
第 30 页：商业策略
目标市场：
- 自然杀伤细胞（Natural Killer Cells）
- 间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells）
- 诱导多能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells）
客户细分：
- 细胞治疗开发商
- CDMO
- 经销商
- 学术界
- 产业界
第 31 页：GMP 设备销售与合作
2023-2024 年，10 项全球合作
覆盖美国、加拿大、中国、韩国等地区
第 32 页：与约翰霍普金斯大学医学院合作
韩国政府资助国际合作项目
2024.10.21：CellShot 设备在 GITCC 中心着陆
- CellShot 站点位于 GITCC 中心
- 美国演示点：美国业务枢纽
- 与约翰霍普金斯研究人员合作
第 33 页：韩国天主教大学首尔圣母医院
高性能 mRNA 细胞工程中心
- 8 位教授参与 mRNA-CAR-NK 免疫治疗
- 5 个项目进行中：
- CD19-mRNA-CAR-NK
- CEA-mRNA-CAR-NK
- CD19-9-mRNA-CAR-NK
- GPC3-mRNA-CAR-NK
- B7H3-mRNA-CAR-NK
中心成立仪式（2024.1.10）
覆盖癌种：血液癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌
第 34 页：CELLSHOT 商业摘要
各公司合作状态：
公司 国家 状态 9X Bio 中国 细胞治疗剂企业专业代理点，目前向 20 家以上临床阶段企业供应设备 MineBio 中国 设备供应完成 / 拥有 2 万家以上大学、研究室客户 加拿大/韩国 加拿大/韩国 合作课题支持予定 / 24 年 3 月加拿大访问 Kick Off Meeting 美国 美国 临床设备供应外 25 亿规模美政府课题支持中 韩国 韩国 设立"高性能 mRNA 基因传递中心"
第 35 页：公司概览
公司名称：株式会社 Femtobiomed（KONEX 327610）
成立日：2011 年 7 月 11 日（创始人李相贤）
注册资本：42 亿韩元
代表理事：李相贤（经营总括）/ 崔周贤（事业化总括）
业种：自然科学及工学研究开发业
主要事业：CellShot Platform 细胞治疗剂生产工艺
员工数：18 名（博士 4 名，硕士 8 名）截至 2024 年 8 月 1 日
融资历程：
- 2016.1 Series A 总计 35 亿韩元
- 2019.2 Series B 总计 59 亿韩元
- 2021.2 Series B bridge 总计 60 亿韩元
- 2022.5 Series C-1 总计 40 亿韩元
- 2023.9 SV Investment 20 亿
- 2024.4 韩国投资伙伴 Series D 总计 50 亿韩元
主要股东：
- 李相贤（代表理事）：38.34%
- WithWin 生物投资 15 号：5.21%
- 其他股东：34.04%
发行股票总数：9,966,421 股（100.00%）
第 36 页：感谢
感谢您！
第 37 页：免责声明及保密
本资料是面向机构投资者和普通投资者的 PRESENTATION 中提供信息的目的，由株式会社 Femtobiomed 编写，禁止带出、复制或对他人重新分发。此外，本文档中包含的实验数据、可视化资料等所有数据仅供研究目的使用，不得用于商业用途。
本资料包含对未来的"预测信息"。预测信息是未经个别确认程序的信息，与未来事件相关，意味着公司未来的预期经营状况和财务业绩。
文档三：Femtobiomed CellShot 分区流式电转染设备彩页（4 页）
第 1 页
：封面
PFEP 分区流式电转染设备
低细胞损伤、高转染效率、支持多次/重复电转染
无需清洗、无需混合、无需 EP 缓冲液
美国 FDA DMF 登记（MF 30803）
传统的电转染是一个相对复杂的过程，在操作之前需将细胞进行清洗后与转染试剂物料混合。
CellShot 分区流式电转染（PFEP）技术提供了一个更精简有效的替代方案。使用 CellShot，细胞可以直接在自己的培养基中转染，且不需要洗涤或与其他材料混合。CellShot 系统处理转染过程的各个方面，使其成为非病毒细胞与基因治疗方便有效的解决方案。
了解 CellShot 转染系统，扫码关注，欢迎咨询
第 2 页：分区流式电穿孔技术
无需细胞洗涤 混合
最小化细胞损伤CellShot PFEP
可传递物质：mRNA、DNA、多肽等
适用细胞：原代细胞、免疫细胞（NK/T）、干细胞（iPSC/MSC）、成纤维细胞、其它细胞系
CellShot 分区流电穿孔（PFEP）技术消除了对电穿孔缓冲液的需求。因此，细胞在培养基中直接被接入 CellShot 系统，与 mRNA 分开，绕过了洗涤或混合步骤。去除洗涤混合过程能够带来更多的好处，因为它避免了细胞损伤、细胞丢失以及离心和混合的手动开放操作。
此外，健康的细胞能承受比受损细胞更多的转染力，因此 CellShot 可以实现更高的转染效率，使得在转染原代细胞时不再面临困难。
CellShot Badger-700
电场 传递
联系方式：(86) 21 51769110 / (86) 18221705797
上海浦东张江盛荣路 388 弄百佳通 1 号楼 7 楼
info@mine-bio.com / www.mine-bio.com
第 3 页：设备与耗材
设备：CellShot Badger-700
耗材：CellShot Cartridges
组件 说明 隐藏式高压连接接口 安全保障 红外温度传感器 实时监测 空气温度和湿度监控 环境追踪 HEPA 过滤空气循环装置 无菌维持 智能内部热空气排出装置 稳定热控制 耗材冷却装置（60W） 珀尔帖冷却 二维码读取器 卡盒识别 压力感应注射泵 精密控制 嵌入式控制单元 自动执行 收获注射器 细胞收集 FDA DMF 30803
标准耗材结构：
- 实时红外温度监控
- 高压输入端子（用于电穿孔）
- PEFP 技术
- 细胞输入 / 材料输入
- 输出
- 细胞注射器 / 材料注射器
第 4 页：确保高细胞活率和转染效率
为细胞治疗商业化生产赋能
指标 数值 SD 转染后活力 98.1% 2.6% Day 3-7 效率 91.5% 6.8% 转染后活力（原代 NK） 96.7% 0% Day 5 效率（原代 NK） 97.1% 1.4%
- 质粒 DNA 转染显示出较高的细胞活力和转染效率
- 可通过连续转染实现多基因递送，同时保持较高的细胞活力和转染效率
- 通过 PFTX 技术制造的 CAR-NK 对癌细胞展示出较高的细胞杀伤毒性
原代 PBMC 配合 eGFP-mRNA 转染显示超过 90% 的活力和效率
CD-19 CAR-NK（人 NK 细胞系）对 Nalm6（CD19 表达癌细胞）的杀伤率超过 91%
原代 CAR-NK 配合 CA19-9 mRNA 生产显示超过 90% 的活力和效率
联系方式：(86) 21 51769110 / (86) 18221705797
上海浦东张江盛荣路 388 弄百佳通 1 号楼 7 楼
info@mine-bio.com / www.mine-bio.com
转发语：Femtobiomed CellShot 平台以独创的 PFEP（分区流式电穿孔）技术，实现"三无一高"——无需细胞洗涤、无需 EP 缓冲液、无细胞损伤，转染效率高达 97.1%（原代 NK），细胞活力 96.7%，且已获得美国 FDA DMF 注册（MF 30803），是目前全球唯一无需 EP 缓冲液的电转染商业化系统。
联系人：李东伟
📞 18045130660 🌐 https://www.biokingdom.top